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廣州競遠生物科技有限公司
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| 細胞水平實驗（2） |
Annexin V/PII雙染法
細胞凋亡研究不僅受到基礎醫學界的重視，也日益受到臨床醫學領域的青睞。通過檢測藥物、基因或蛋白對細胞凋亡及凋亡調控基因的影響，在腫瘤防治、老年癡呆、艾滋病、自身免疫病，心肌梗塞等研究上都發揮著積極的作用。
3、流式鑒定細胞表面抗體
實驗原理
基本原理就是用熒光標記的單克隆抗體來識別細胞表面的抗原(也就是所謂的表面標記)，然后通過流式細胞儀來檢驗表面抗原的多少和種類(也就是熒光強度，代表了抗體結合的種類和數量)來鑒定細胞是哪類
應用
細胞鑒定分類等，檢測陽性表達細胞的比例。
實驗流程
1、制備樣品的單細胞懸液
2、標記流式抗體
3、流式上機檢測。
4、活性氧(ROS)檢測
實驗原理
活性氧檢測( Reactive Oxygen Species Assay Kit是一種基于熒光染料 DCFH-DA(2，7- Dichlorodi- hydrofluoresceindiacetate)的芡光強度變化，定量檢測細胞內活性氧水平的*常用方法。
DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜。進入細胞內后，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會通透細胞膜，因此探針很容易被積聚在細胞內。細胞內的活性氧能夠氧化無熒光的DCFH生成有芡光的DCF。綠色熒光強度與活性氧的水平成正比。在*大激發波長480nm，*大發射波長525nm處，使用熒光顯微鏡，流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測熒光信號。 Rosup為活性氧陽性誘導藥物，根據其芡光信號強度，可分析活性氧的真正水平。
檢測
原位裝載探針法:激光共聚焦顯徴鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。收集細胞后裝載探針:用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
4、線粒體膜電位檢測
實驗原理
JC-1是一種碳氰化合物類陽離子芡光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發波長為527nm，呈綠色熒光;當丁C-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發出紅色的芡光，激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光，根椐這特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。
實驗流程
1.細胞培養;
2.用適當的方法誘導細胞凋亡，同時設立陰性對照組和陽性對照組，收集細胞;
3.用PBS洗滌細胞三次，收集不多于1×10的細胞;
4.取100pL10× Incubation Buffer/加900L滅菌去離子水稀釋成1 |
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