|
廣州競遠生物科技有限公司
| 聯系人：向遠
先生 (市場經理) |
| 電 話：020-84131654 |
手 機：18028560893  |
 |
|
 |
|
| 分子水平實驗（3） |
雙熒光素酶報告基因檢測
實驗原理
通過將感興趣的目的基因轉錄調控元件構建到帶熒光素酶( firefly luciferase)的表達載體，如pGL3，構建成報告基因質粒，使這段DNA序列調控 luciferase的轉錄。然后將報告基因質粒轉染細胞，適當刺激或處理后裂解細胞，并加入底物熒光素后(luciferin)， luciferase可以催化熒光素發出熒光，從而可以通過測量熒光值的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調控元件的影響。為避免由于質粒轉染細胞時效率的差異帶來的誤差，可以同時轉入 Renilla?芡光酶素的報告基因質粒作為內參，即雙熒光報告系統。該實驗可以用于研究轉錄因子對promoter或 enhancer序列的調控，也可以用于研究受體活性，細胞內信號通路，或者 MICRORNA對基因表達的調控。
應用
1.澘在啟動子/啟動子核心區域檢測
2.澘在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測
3.啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測
4.啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用;
5.病毒/細胞相互作用;
6.藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或增強);
7.射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節(抑制或増強)
8. MICRORNA靶基因驗證。
染色質免疫共沉淀相關服務
實驗原理
染色質免疫共沉淀( Chromatin Immunoprecipitation，ChIP技術主要是用于研究DNA和蛋白質的相互作用。染色質主要是由組蛋白和纏繞在上面的DNA組成。在染色質上還結合了許多轉錄因子、染色質重塑相關蛋白和非編碼RNA。染色質上結合的蛋白或者組蛋白上不同的共價修飾可以通過改變染色質的結構，或者招募相關的因子來調控基因的表達。通過ChIP技術，我們可以研究不同的組蛋白修飾、轉錄因子以及染色質上結合的一些其他蛋白，在基因組上的分布。
ChIP實驗的主要原理是，當DNA和蛋白結合或者距離很近時，通過甲醛固定交聯，在DNA和蛋白分子之間形成共價鍵。將染色質通過超聲波破碎或者徴球菌核酸酶處理，打斷成小片段，然后通過特異性的ChIP級別抗體，富集目的蛋白。經過逆交聯處理之后，消化水解目的蛋白，回收得到目的DNA，從而得到與目的蛋白相互作用的DNA信息。
整體實驗流程
1.細胞交聯
2.抗體有效性檢測
3.免疫共沉淀
4.建庫測序/PCR驗證
樣本要求
動物細胞:3x107～5x107，1％的甲醛交聯，干冰運輸。
動物組織:0.5-2g，對于較大的組織，先切成1-5mm的組織塊，干冰運輸。
植物組織:5-20g，干冰運輸。
抗體需要提前驗證滿足ChIP或者IP實驗要求。
生物信息分析內容
標準信息分析
1.去接頭污染，去低質量 reads和測序質量評估
2.ChIP測序序列與參考基因組序列的比對
3.C |
 |
| |
|
|
 |
|
|
免責聲明：以上所展示的信息由會員自行提供，內容的真實性、準確性和合法性由發布會員負責，www.qy6.com對此不承擔任何責任。如有侵犯您的權益，請來信通知刪除。