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Good’s緩沖液HEPES和PIPES教你如何選擇？

詳細說明

我們在使用Good’s緩沖液的時候，總是不經意的把Good’s緩沖液中的HEPES和PIPES弄混，認為它們是一樣的，導致無法很準確的區別開。其實它們之間有共性但是也存在著很多不同的特性。特別是我們在實驗過程中，一點細微的差別可能就導致實驗過程中的失敗。所以我們要清楚什么是緩沖液，它是做什么的？才能去區分緩沖液中HEPES和PIPES它們之間的差別到底在哪里？我們在使用時應該注意些什么？

緩沖液是一類專用于生命科學研究的緩沖體系，在生物化學實驗中，緩沖溶液起著不可或缺的作用，它能夠抵制外界少量強酸和強堿的影響，為體系維持最貼近生理環境的pH值。HEPES和PIPES緩沖液都是生物實驗中常用的緩沖液。

德晟生物緩沖劑包裝圖片

HEPES的pH緩沖范圍是6.8-8.2，是一種兩性離子生物緩沖劑，溶于水，不與金屬離子形成穩定的配合物，多數情況下，不會干擾生物化學過程，可廣泛應用于多種生物化學反應，并在某些細胞培養基中用作緩沖試劑。HEPES常用于各種類型生物體的細胞培養基中；在蛋白質研究中，PIPES常用作陽離子交換色譜法中結合緩沖液的組分和洗脫液；在DNA研究中，PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液，AFM以及電穿孔實驗中的緩沖液。另外，HEPES對DNA和限制酶之間的反應有一定干擾，也不適合用于Lowry氏法測定蛋白質含量。HEPES緩沖液常用于細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質和酶的研究工作，以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L，一般培養液內含20mmol/LHEPES即可達到緩沖能力。

PIPES的pH緩沖范圍是6.1-7.5，不溶于水，溶于NaOH水溶液。PIPES不同于含二（2-羥乙基）氨基基團的緩沖劑（如Bis-tris，Bicine），與多數金屬離子不能形成穩定配合物，適用于含有金屬離子的溶液體系中的緩沖劑。根據已有的研究結果，PIPES可被應用于使用磷酸纖維素色譜純化微管蛋白，用于凝膠過濾法純化重組GTP結合蛋白ARF1和ARF2，作為緩沖液從大腸桿菌中結晶轉酮酶。另外，由于PIPES能形成自由基，因此不適合應用于氧化還原體系。在陽離子交換色譜法，應當使用低濃度的PIPES緩沖液，這是因為PIPES具有相對較大的離子強度，而且其pKa值具有濃度依賴性。

       

以上可知PIPES和HEPES都不能和金屬離子形成穩定的配合物，適合于含有金屬離子的溶液體系。但它們之間也具有一定的差異性，溶解性方面，PIPES不溶于水，而HEPES具有良好的水溶性；緩沖范圍方面，PIPES偏酸性到中性，HEPES偏中性到堿性，這主要是由于兩者的結構差異決定的，PIPES有兩個磺酸基，HEPES