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| Tris緩沖液和HEPES緩沖液的區別 |
標簽：Tris，HEPES，區別
  在很多的生化實驗中，需要用到生物緩沖劑，它的作用主要是能夠抵制外界少量強酸和強堿的影響，給反應體系提供一個最合適的pH值。我們最常用的緩沖液有Tris緩沖液和HEPES緩沖液，很多人常常分不清楚二者的區別，這里德晟公司將給大家做一個介紹：
生物緩沖劑系列
簡介及應用：
  Tris緩沖液：三羥甲基氨基甲烷（Tris）為弱堿性，在25°C下pKa為8.1，其緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0~9.2之間，在生物化學實驗中常用的pH值為6.8、7.4、8.0、8.8。常在電泳和凝膠實驗中起緩沖作用，并被廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑，還可用于線蟲的中間纖維的形成。其衍生的TE、TAE、TBE等緩沖液，常用于DNA的穩定、存儲以及提取。
HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）：是一種兩性離子生物緩沖劑，屬于Good’s緩沖液，有效緩沖范圍6.8~8.2，可廣泛應用于多種生物化學反應，并在某些細胞培養基中用作緩沖試劑。其使用終濃度為10~50mmol/L，一般培養液內含20mmol/L即可達到緩沖能力。此外，由于無細胞毒性，HEPES緩沖液常用于細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質和酶的研究工作，以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
兩種緩沖液的特征
Tris緩沖溶液：
1、本身呈堿性，只用Tris-HCl緩沖體系即可配制pH范圍由酸性到堿性的緩沖液，并且可以與其他物質組成多種緩沖體系，如TE、TBS、TAE、TBE等衍生緩沖液；
2、對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀；
3、受溶液濃度影響大，稀釋十倍，pH值變化大于0.1；
4、受環境影響較大，一般來說，溫度每升高一度，pH值下降0.03；
5、易吸收空氣中的CO2。
HEPES緩沖液：
1、pKa值介于6.0和8.0之間；
2、在水中具有高溶解度；
3、具有膜不透性，不易穿透生物膜；
4、對生化反應影響有限，可耐化學作用和酶解作用，且不與金屬離子生成復合物或沉淀；
5、有極低的可見光和紫外光吸收； 
6、離子濃度、溶液組成和溫度對解離的影響小；
緩沖液配制方法
1、Tris-HCl緩沖液的配制有兩種方法：
①分別配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按常用表中所列體積混合即可。由于標準濃度的稀鹽酸不易配制，所以常用第二種方法；
②以配置1L 0.1mol/L的Tris-HCl緩沖液為例：稱12.11g Tris堿溶于950mL～970mL去離子水中，邊攪拌邊滴加4N HCl，用pH計測定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水補足到1L。
2、 HEPES緩沖溶液的配制，根據用途，一種是單純的HEPES＋NaOH，另一種是HEPES＋鹽：
HEPES＋NaOH （500mL）：119.15g HEPES溶 |
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