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| TRIS（77-86-1）在植物蛋白質(zhì)提取中的應(yīng)用 |
關(guān)鍵詞：生物緩沖液、TRIS、三羥甲基氨基甲烷、CAS77-86-1,Tris中文品名為三羥甲基氨基甲烷，CAS77-86-1。是一種白色結(jié)晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，對(duì)銅、鋁有腐蝕作用，有刺激性的化學(xué)物質(zhì)。
蛋白質(zhì)組學(xué)即從蛋白質(zhì)組的水平進(jìn)一步認(rèn)識(shí)生命活動(dòng)的機(jī)理和疾病發(fā)生的分子機(jī)制，而在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中，蛋白質(zhì)的提取是最基礎(chǔ)也最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一，Tris是植物蛋白質(zhì)提取中常用的試劑，方法包括Tris-HCl法、酚法、Tris-丙酮-酚法。本文將對(duì)這幾種方法進(jìn)行分析總結(jié)。
1.Tris-HCl法
Tris-HCl法提取的蛋白圖譜效果比用TCA丙酮法提取的效果好。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量區(qū)域分布不均勻，蛋白點(diǎn)不清晰，水平條紋與豎直條紋較為嚴(yán)重，而Tris-HCl法克服了上述缺點(diǎn)，并分離出TCA丙酮法所不易分離出的酸性蛋白，除分離到較多的中等分子量的蛋白質(zhì)外，還能得到很多的高分子量和低分子量蛋白質(zhì)。
Tris-HCl法操作簡(jiǎn)便，時(shí)間較短成本適中等優(yōu)勢(shì)，提取步驟簡(jiǎn)單，蛋白質(zhì)損失少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好。
2.酚法
酚法利用了Tris-飽和酚的特性：酚是蛋白質(zhì)的良好溶劑，在樣品制備過程中，蛋白質(zhì)和脂類溶于酚相，鹽、核酸、多酚和多糖等可溶性物質(zhì)進(jìn)入水相；通過增加離心力和離心時(shí)間，可以盡可能地把密度大的糖離至上清液的上層；酚相中的蛋白質(zhì)通過乙酸銨的甲醇溶液沉淀，再用冷丙酮多次清洗蛋白，可以去除色素和銨離子等雜質(zhì)。
該方法在處理含有大量干擾物質(zhì)的植物樣品中非常有效，但這種方法相對(duì)復(fù)雜，耗時(shí)長。
3.Tris-丙酮-酚法
將TCA丙酮法與酚法結(jié)合后用于提取蛋白，融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的優(yōu)點(diǎn)。先用含有乙酸銨的甲醇溶液清洗殘留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上，再使用酚和SDS的混合物來溶解蛋白。酚-SDS聯(lián)合提取比酚、SDS緩沖液?jiǎn)为?dú)提取更有效。Tris-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果，而且電泳圖譜背景和條帶都很清晰，蛋白質(zhì)點(diǎn)多，可廣泛應(yīng)用于植物的葉片和果實(shí)中蛋白質(zhì)的提取。
該提取方法非常省時(shí)，提取的總時(shí)間在1h左右，大大縮短了傳統(tǒng)方法提取蛋白所需的時(shí)間。
對(duì)于植物蛋白的提取，不僅樣品多樣，而且每種植物所含有的成分也不同，其中的干擾因素也多，所以沒有一種方法可以適用于各種樣品。在實(shí)驗(yàn)中，首先要明確目的，是獲得一種目標(biāo)蛋白還是獲得所有蛋白，然后再根據(jù)樣品特點(diǎn)來選擇提取方法，進(jìn)行摸索優(yōu)化。
上述講述TRIS在植物蛋白提取中的應(yīng)用，除此之外TRIS（三羥甲基氨基甲烷）還有許多用途。可用于磷霉素的中間體，亦可作硫化促進(jìn)劑、化妝品(霜?jiǎng)⑾磩?、礦物油、石蠟乳化劑。還可用作酸性氣體吸收劑，配制緩沖液、表面活性劑、乳化劑和促進(jìn)劑。德晟研發(fā)銷售T |
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