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·生物化工類

微生物基本知識(shí)：β-半乳糖苷酶試驗(yàn)！

詳細(xì)說(shuō)明

微生物基本知識(shí)：β-半乳糖苷酶試驗(yàn)！

β-半乳糖苷酶試驗(yàn)

一、液體法（ONPG法）

⒈成分

鄰硝基苯β-D-半乳糖苷(ONPG) 60.0 mg

0.01mol/L 磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10.0 mL

1%蛋白胨水(pH7.5) 30.0 mL

⒉制法

將ONPG溶于緩沖液內(nèi)，加入蛋白胨水，以過(guò)濾法除菌，分裝于10mm×75mm 試管內(nèi)，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。

⒊試驗(yàn)方法

自瓊脂斜面挑取培養(yǎng)物一滿環(huán)接種，于36 °C1 °C培養(yǎng)1 h~3 h和24 h觀察結(jié)果。如果β-D-半乳糖苷酶產(chǎn)生，則于1 h~3 h變黃色，如無(wú)此酶則24 h不變色。

二、平板法（X-Gal法）

⒈成分

蛋白胨 20.0 g

氯化鈉 3.0 g

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg

瓊脂 15.0 g

蒸餾水 1 000.0 mL

pH 7.20.1

⒉制法

將上述各成分加熱煮沸于1L水中，冷卻至25 ℃左右校正pH至7.20.1，115 °C 高壓滅菌10 min。傾注平板避光冷藏備用。

⒊試驗(yàn)方法

挑取瓊脂斜面培養(yǎng)物接種于平板，劃線和點(diǎn)種均可，于36 °C1 °C培養(yǎng)18h~24 h觀察結(jié)果。如果β-D-半乳糖苷酶產(chǎn)生，則平板上培養(yǎng)物顏色變藍(lán)色，如無(wú)此酶則培養(yǎng)物為無(wú)色或不透明色，培養(yǎng)48 h~72 h后有部分轉(zhuǎn)為淡粉紅色。

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