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蘇州艾瑞德生物科技有限公司
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先生 (主管) |
| 電 話：0512-89171136 |
| 手 機：15850166981 |
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| 環(huán)丙沙星快速檢測試劑盒 |
檢測范圍：7.8 ng/ml-500 ng/ml
*低檢測限：1.95 ng/ml
特異性：本試劑盒可用于快速檢測環(huán)丙沙星。有一定交叉反應。
交叉反應： 環(huán)丙沙星100%
諾氟沙星150%
氧氟沙星100%
沙拉沙星130%
恩諾沙星86%
有效期：6個月
預期應用：ELISA法定量測定牛奶、牛肉、豬肉、羊肉、雞、火雞、魚和蝦中的環(huán)丙沙星殘留量。
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。
2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。
4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
概述
回旋酶抑制劑分為四種亞群，恩諾沙星（代謝產物：環(huán)丙沙星）和達氟沙星屬于氟奎諾酮，是允許使用的獸用藥物。氟奎諾酮是廣譜抗菌素，廣泛應用養(yǎng)殖業(yè)，特別是牛、豬和雞。在過去的幾年里，氟奎諾酮的使用有所增加，大量的奎諾酮類藥物被用于預防傳染病，特別是在雞、豬和魚/蝦養(yǎng)殖廠。
實驗原理
本試劑盒采用免疫競爭法檢測環(huán)丙沙星。微孔板上包被有抗環(huán)丙沙星抗體。加入環(huán)丙沙星酶結合物和環(huán)丙沙星標準品或樣品，游離環(huán)丙沙星與環(huán)丙沙星結合物競爭微量反應板上的抗環(huán)丙沙星抗體，沒有結合的酶結合物被洗去。再向反應孔中加入相應反應底物TMB，作用一定時間后，結合的酶結合物將TMB轉化為藍色，轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)丙沙星呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 已包被兔抗三聚氰胺抗體的酶聯板(Assay plate )：一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）：2×100ul/瓶。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4. 辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物（HRP - CPFX）：1×100ul/瓶（1：100）。
5. 辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物稀釋液（HRP –CPFX Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 超聲清洗器
5. 離子交換小柱（PCX）
6. 氮氣吹干儀
7. 干凈的試管和Eppendof管
8. 系列可調節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，*好用多通道移液器
9. 蒸餾水，容量瓶等
樣品制備：
牛奶不需要處理；肉、魚、蝦等需均質、提取、離心、稀釋。
標本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。*后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶濃度為500 ng/ml，以樣品稀釋液做系列倍比稀釋，分別稀釋500 ng/ml，250 ng/ml， 125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，15.6 ng/ml，7.8 ng/ml。樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml。
辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔50ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物加990ul辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物工作液。盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應30分鐘-1小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 溫育后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。
3. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
4. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
5. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是*后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、辣根過氧化物酶標記環(huán)丙沙星結合物工作液。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間*好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，*好做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請*后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
9. 本產品適用于大量樣本的快速篩查。由于生物試驗存在人為及不可預知的影響因素，本試劑盒得到的檢測結果僅為參考，不能據此做出任何結論。 |
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