pPICHOLI載體可以讓異源基因在P. pastoris中表達,同時也能在原核的E.coli中表達。這個載體包含可誘導(酵母)的乙醇脫氫酶(AOX)啟動子和E.coli T7啟動子,這樣就允許它可以在P. pastoris和E.coli中自主復制。因此,載體的線性化就不再是必需的了,而且,少量的DNA就可成功的轉化P. pastoris。
由于PARS序列被整合到載體中,使從酵母中提取的質粒非常簡單的實現復原。不需要將亞克隆轉入一系列表達載體中,也不需對陽性菌株進行檢測,而多克隆位點又使DNA片段很方便的連接到載體中。
特點:
1.原核表達系統是一個易于操作、花費少,并且可得到高水平異源蛋白產物;
2.P. pastoris/pPICHOLI 系統是一個強有力的真核表達系統,由于結合了AOX或CUP1啟動子,使其可以快速生長。
3.適合表達翻譯后修飾的可溶性蛋白和不適宜在大腸桿菌中表達的蛋白(真核)(例如一些毒素蛋白);
4. 容易克隆和高的轉化效率;
5. 方便的親和純化和重組蛋白的檢測。
穿梭表達載體pPICHOLI和pPICHOLI-HA結合了真核和原核啟動子元件。噬菌體T7啟動子,含有主要衣殼蛋白的核糖體結合位點,促進細菌的表達,它被放在P. pastoris啟動子的下游。強的乙醇脫氫酶啟動子(AOX)是被緊緊調控的,在含有葡萄糖的培養基中,蛋白表達是完全被抑制的,而生長在甲醇中,則可被*大限度的誘導。
pPICHOLI-1(3579bp)有兩個G bases直接位于Sal位點的上游,pPICHOLI-2(3578bp)和pPICHOLI-3(3577bp)分別敲除一個和兩個G bases。
pPICHOLI-HA載體含有一個HA(血球凝集素)抗原決定簇代替了生物素酰化序列。
pPICHOLI-C加進了釀酒酵母CUP1 啟動子(代替了AOX啟動子)。這個載體沒有T7啟動子,不適合原核蛋白的表達。
由于使用了共同的選擇標記zeocin,這個穿梭載體仍然是小的(~3.6和3.2kb),因此,操作、克隆和轉化都很方便。通過將Pichia特異的自主復制序列(PARS1)整合到pPICHOLI載體中,線性化不再是必需的,轉化效率增加到105轉化體/ug DNA。pPICHOLI雙重表達載體包括一個RGS(His)6tag和一個生物素化序列,這樣就使表達蛋白易于檢測和快速的純化。
order#
description
amount*
PPICH
pPICHOLI-1 vector DNA
pPICHOLI-2 vector DNA
pPICHOLI-3 vector DNA
pPICHOLI-C vector DNA
pPICHOLI-HA vector DNA
sequencing primers |
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