黃曲霉毒素M1(Aflatoxins M1)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品編號(hào):LD013
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中黃曲霉毒素M1的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測(cè)牛乳及其他乳制品等樣品中黃曲霉毒素M1的殘留。
三、試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)
* 檢 測(cè) 時(shí) 間 : 30 min
試劑盒靈敏度: 0.05 ppb(μg/kg)
* 試劑盒檢測(cè)純陰性生鮮奶樣本的背景值
< 0.05 ppb,且直接點(diǎn)樣;
* 試劑盒提供工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品,使用更方便。
試劑盒檢測(cè)樣本的回收率和準(zhǔn)確度:
樣本 回收率
牛奶 70%-120%
奶粉、奶酪等 70%-120%
試劑盒特異性:
藥物名稱 交叉反應(yīng)率(%)
黃曲霉毒素M1 100%
黃曲霉毒素G1 < 1%
四、所需材料
儀器:微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管(10 mL)、天平(感量0.01 g)、洗耳球、離心管(5 mL, 50 mL)、三角瓶(100 mL)
微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;1μL~10 μL、10 μL~100 μL
多道 50μL~300 μL
試劑:去離子水。
五、 試劑盒組成
序號(hào) 組成部分 96T裝量
1 黃曲霉毒素M1酶標(biāo)板 12×8孔
2 黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品濃度*6 6×1 mL
3 黃曲霉M1高濃度標(biāo)品100ppb 1 mL
4 黃曲霉毒素M1酶標(biāo)物 13 mL
5 黃曲霉毒素M1抗體 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 2×黃曲霉M1濃縮樣品稀釋液 45 mL
*注:6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為:0 ppb, 0.05 ppb, 0.15 ppb,
0.45 ppb, 1.35 ppb, 4.05 ppb,直接使用。
六、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序
將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,待其完全回 升至室溫(20~25℃)后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、抗體:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μL到對(duì)應(yīng)的微孔中,加入黃曲霉毒素M1酶標(biāo)物50μL /孔,再加入黃曲霉毒素M1抗體50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min。
洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,
加入洗滌工作液250μL/孔,每次靜置20s,甩去孔內(nèi)液體,重復(fù)洗滌3次,*后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
顯色:加入底物液A液50μL/孔,再加底物
液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。
測(cè)定:加入終止液50μL/孔,用酶標(biāo)儀立即 測(cè)定450nm處的吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)檢測(cè)。
七、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素M1實(shí)際濃度。(詳見(jiàn)試劑盒專業(yè)分析軟件,以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。)
八、 注意事項(xiàng)
① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
② 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
③ 不使用過(guò)了有效期的試劑盒,不交換使用不同批號(hào)的試劑。
④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時(shí)間為10~15min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20 min,反之則減短反應(yīng)時(shí)間。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件: 2~8℃
保 質(zhì) 期: 12個(gè) |
 |
|