黃曲霉毒素B1（Aflatoxins B1）ELISA檢測試劑盒說明書
產(chǎn)品編號：LD012
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中黃曲霉毒素B1的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測糧食、飼料、食用油等樣品中黃曲霉毒素B1的殘留。
三、試劑盒特點及技術(shù)指標(biāo)
檢 測 時 間 ： 30 min
試劑盒靈敏度： 0.1 ppb(μg/kg)
試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜1 ppb
試劑盒檢測樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：
樣本 檢測下限 回收率
花生、玉米等糧食 2ppb 70%-120%
飼料 5ppb 70%-120%
食用油 2ppb 70%-120%
試劑盒特異性：
藥物名稱 交叉反應(yīng)率（%）
黃曲霉毒素B1 100%
黃曲霉毒素M1 < 1%
四、所需材料
儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、振蕩器、渦旋儀、離心機(jī)、水浴鍋、刻度移液管（10 mL）、洗耳球、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）、漏斗、分液漏斗、燒杯、定量分析濾紙
微量移液器：單道 1μL～10 μL、10 μL～100μL
多道 50μL～300μL
試劑：甲醇、二氯甲烷、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號 組成部分 96T裝量
1 黃曲霉毒素B1酶標(biāo)板 12×8孔
2 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品濃度*6 6×1 mL
3 黃曲霉B1高濃度標(biāo)品1 ppm 1 mL
4 黃曲霉毒素B1酶標(biāo)物 13 mL
5 黃曲霉毒素B1抗體 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 2×黃曲霉B1濃縮樣品稀釋液 45 mL
*注：6個標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb,
0.9 ppb, 2.7ppb, 8.1 ppb，直接使用。
六、 酶標(biāo)免疫測定程序
將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其完全回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μL到對應(yīng)的微孔中，加入黃曲霉毒素B1酶標(biāo)物50μL/孔，再加入黃曲霉毒素B1抗體50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，
加入洗滌工作液250μL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，*后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
顯色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物
液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10～15min，*后一次用吸水紙拍干。
測定：加入終止液50μL/孔，用酶標(biāo)儀立即 測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測。
七、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素B1實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計算。）
八、 注意事項
① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
② 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。
④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到20min，反之則減短反應(yīng)時間。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質(zhì) 期： 12個月 |
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