磺胺類（Sulfonamides）多殘留 ELISA檢測試劑盒說明書
產品編號：LD022
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中磺胺類的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測組織、牛奶、蜂蜜樣本中磺胺多殘留藥物的殘留。
三、試劑盒特點及技術指標
* 檢 測 時 間 ： 60 min
試劑盒靈敏度： 1 ppb(μg/kg)
* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜1 ppb
* 樣本處理方法更加簡潔準確
序號 喹諾酮類藥物 組織檢測下限
1 磺胺甲惡唑 ≤4 ppb
2 磺胺嘧啶 ≤4 ppb
3 磺胺噻唑 ≤4 ppb
4 磺胺甲惡唑 ≤4 ppb
5 磺胺間甲氧嘧啶 ≤4 ppb
6 磺胺對甲氧嘧啶 ≤4 ppb
7 磺胺間二甲氧嘧啶 ≤6 ppb
8 磺胺氯噠嗪 ≤6 ppb
9 磺胺異惡唑 ≤4 ppb
10 磺胺苯吡啶 ≤4 ppb
試劑盒檢測樣本的靈敏度：
試劑盒準確度：
樣本 回收率
動物組織 70 %-120 %
牛 奶 70 %-120 %
蜂 蜜 70 %-120 %
四、所需材料
儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、旋轉蒸發儀/氮氣吹干裝置、均質器、振蕩器、離心機、水浴鍋、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：單道 1μL～10 μL、10 μL～100 μL
多道 50 μL～300 μL
試劑：乙腈、丙醇、氯化鈉、氫氧化鈉、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號 組成部分 96T裝量
1 磺胺類酶標板 12×8孔
2 磺胺類標準品工作濃度*6 6×1 mL
3 磺胺類高濃度標準品1 ppm 0.5 mL
4 磺胺類酶標物 13 mL
5 磺胺類抗體 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 2×磺胺類樣品稀釋液 45 mL
*注：6個標準品濃度為：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81 ppb，直接使用。
六、 酶標免疫測定程序
將所需試劑從冷藏環境中取出，待其完全回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標準品和樣品雙孔平行的數量使用微孔。
加標準品/樣品、抗體：加標準品/樣品50μL
到對應的微孔中，再加入磺胺類抗體50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環境中反應30 min。
洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，
加入洗滌工作液250 μL/孔，每次靜置20s，甩去孔內液體，重復洗滌3次，（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
加酶標物：加入磺胺類酶標物100 μL /孔，
輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應30 min，甩干孔內液體，重復洗板3次，*后一次用吸水紙拍干。
顯色：加入底物液A液50 μL/孔，再加底物
液B液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環境中反應15～20 min。
測定：加入終止液50 μL/孔，用酶標儀立即 測定450 nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630 nm）檢測。
七、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以磺胺類標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中磺胺類實際濃度。（詳見試劑盒專業分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）
八、 注意事項
① 洗板拍干后應立即進行下一步操作。
② 反應終止液為2 M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。
④ 0標準的吸光度（450/630 nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20 min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30 min，反之則減短反應時間。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質 期： 12個月 |
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