喹諾酮類（Quinolones）ELISA檢測(cè)試劑盒說明書
產(chǎn)品編號(hào)：LD019
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中喹諾酮類的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測(cè)動(dòng)物組織（肉類、水產(chǎn)）、蜂蜜樣品中氟喹諾酮類藥物的殘留。
三、試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)
* 檢 測(cè) 時(shí) 間 ： 50 min
試劑盒靈敏度： 0.1 ppb(μg/kg)
* 試劑盒檢測(cè)純陰性樣本的背景值＜0.3 ppb；
* 樣本處理方法簡(jiǎn)單，結(jié)果符合率高
試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度：
序號(hào) 喹諾酮類藥物 檢測(cè)下限
1 環(huán)丙沙星（CIF） ≤2 ppb
2 恩諾沙星（ENR） ≤2 ppb
3 依諾沙星（ENO） ≤2 ppb
4 氧氟沙星（OFL） ≤2 ppb
5 諾氟沙星（NOR） ≤2 ppb
6 培氟沙星（PEF） ≤2 ppb
7 達(dá)氟沙星（DAN） ≤2 ppb
8 洛美沙星（LOM） ≤2 ppb
試劑盒樣本準(zhǔn)確度：
樣本名稱 回收率（%）
動(dòng)物組織 70 %-120 %
蜂 蜜 70 %-120 %
四、所需材料
儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、水浴鍋、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：?jiǎn)蔚?nbsp;1 μL～10 μL、10 μL～100 μL
多道50 μL～300 μL
試劑：甲醇、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號(hào) 組成部分 96T裝量
1 喹諾酮酶標(biāo)板 12×8孔
2 喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品工作濃度*6 6×1 mL
3 喹諾酮高濃度標(biāo)準(zhǔn)品1 ppm 0.5 mL
4 喹諾酮酶標(biāo)物 13 mL
5 喹諾酮抗體 7mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 2×喹諾酮樣品稀釋液 45 mL
*注：6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb,
0.9 ppb, 2.7 ppb, 8.1 ppb，直接使用。
六、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序
將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其完全回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50 μL
到對(duì)應(yīng)的微孔中，再加入喹諾酮抗體50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20 min。
洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，
加入洗滌工作液250 μL/孔，每次靜置20 s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，*后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
加酶標(biāo)物：加入喹諾酮酶標(biāo)物100 μL /孔，
輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光反應(yīng)20 min，甩干孔內(nèi)液體，重復(fù)洗板3次，*后一次用吸水紙拍干。
顯色：加入底物液A液50 μL/孔，再加底物
液B液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10 min。
測(cè)定：加入終止液50 μL/孔，用酶標(biāo)儀立即 測(cè)定450 nm處的吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630 nm）檢測(cè)。
七、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮實(shí)際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。）
八、 注意事項(xiàng)
① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
② 反應(yīng)終止液為2 M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號(hào)的試劑。
④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630 nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20 min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30 min，反之則減短反應(yīng)時(shí)間。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質(zhì) 期： 12個(gè)月 |
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