氯霉素ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)時(shí)間為50min,靈敏度達(dá)0.1ppb。
氯霉素(Chloramphenicol)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品編號(hào):LD005
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中氯霉素的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測(cè)動(dòng)物組織、蜂蜜樣品中氯霉素的殘留。
三、試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)
檢 測(cè) 時(shí) 間 : 50 min
試劑盒靈敏度: 0.1ppb(μg/kg)
試劑盒檢測(cè)純陰性樣本的背景值<0.1ppb
試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度:
樣本 檢測(cè)下限 回收率
蜂蜜 0.1 ppb 70 %-120 %
雞肉、豬肉、蝦、魚(yú) 0.1ppb 70 %-120 %
試劑盒特異性:
藥物名稱(chēng) 交叉反應(yīng)率(%)
氯霉素 100 %
甲砜霉素 < 0.1 %
氟甲砜霉素 < 0.1 %
四、所需材料
儀器:微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、
水浴鍋、刻度移液管(10 mL)、天平(感量0.01 g)、離心管(5 mL, 50 mL)
微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;1μL~10 μL、10 μL~100 μL
多道 50 μL~300 μL
試劑:乙酸乙酯、正己烷、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號(hào) 組成部分 96T裝量
1 氯霉素酶標(biāo)板 12×8孔
2 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品工作濃度*6 6×1 mL
3 氯霉素高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb 0.5 mL
4 氯霉素酶標(biāo)物 13 mL
5 氯霉素抗體 7 mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 2×氯霉素樣品稀釋液 45 mL
*注:6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為:0 ppb, 0.1ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7 ppb, 8.1ppb,直接使用。
六、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序
將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,待其完全回升至室溫(20~25℃)后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微 孔。
加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、抗體:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50 μL到對(duì)應(yīng)的微孔中,再加入氯霉素抗體50 μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中孵育20 min。
洗板:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,
加洗滌工作液250 μL/孔,每次靜置20 s,甩去孔內(nèi)液體,重復(fù)洗滌3次,*后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。
加酶標(biāo)物:加入氯霉素酶標(biāo)物100 μL/孔,
輕輕振蕩混勻,37℃避光環(huán)境中孵育20 min,甩干孔內(nèi)液體,重復(fù)洗板3次,*后一次用吸水紙拍干。
顯色:加入底物液A液50μL/孔,再加底物液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中顯色10min。
測(cè)定:加入終止液50 μL/孔,用酶標(biāo)儀立即測(cè)定450 nm處的吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630 nm)檢測(cè)。
七、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。(詳見(jiàn)試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件,以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。)
八、 注意事項(xiàng)
① 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于1.0(A450nm<1.0)時(shí),可延長(zhǎng)孵育時(shí)間5-10分鐘,反之(A450nm>2.5),則縮短顯色時(shí)間。
② 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
③ 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
④ 不使用過(guò)了有效期的試劑盒,不交換使用不同批號(hào)的試劑。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件: 2~8℃
保 質(zhì) 期: 12個(gè)月 |
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