孔雀石綠ELSIA試劑盒的檢測時間為75min,靈敏度0.1ppb,樣品處理不需氮吹，使用方便。
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中孔雀石綠的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測魚蝦、水樣中孔雀石綠的殘留。
三、試劑盒特點及技術指標
* 檢 測 時 間 ： 75min
試劑盒靈敏度： 0.1ppb(μg/kg)
* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜0.3 ppb；
* 樣品處理方法無需氮吹，節省了人力物力；
* 試劑盒提供近工作濃度標準品，使用方便。
試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：
樣本 檢測下限 回收率
蝦、魚 1ppb 70%-120%
水樣 0.5 ppb 70%-120%
藥物名稱 交叉反應率（%）
孔雀石綠 100%
隱性孔雀石綠 <1%
結晶紫 70%
隱性結晶紫 <1%
試劑盒特異性：
四、所需材料
儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：單道 1μL～10 μL、10 μL～100μL
多道 50μL～300μL
試劑：乙腈、去離子水
五、 試劑盒組成
序號 組成部分 96T裝量
1 孔雀石綠酶標板 12×8孔
2 10×孔雀石綠標準品*6 6×1 mL
3 隱性孔雀石綠高濃度標品1ppm 0.5mL
4 孔雀石綠酶標物 13 mL
5 孔雀石綠抗體 7mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 終 止 液 7 mL
9 10×濃縮洗滌液 40 mL
10 10×孔雀石綠樣品稀釋液 12 mL
11 孔雀石綠樣品提取液 40mL
*注：6個10×標準品濃度為：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27ppb, 81 ppb，稀釋10倍使用，現配現用，配后避光放置并于半小時內使用，具體見溶液配制。
六、 酶標免疫測定程序
將所需試劑從冷藏環境中取出，待其完全回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
按標準品和樣品雙孔平行的數量使用微孔。
加標準品/樣品、抗體：加標準品/樣品50μL
到對應的微孔中，再加入孔雀石綠抗體50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃反應30min。
洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，
加入洗滌工作液250μL/孔，每次靜置20s，甩去孔內液體，重復洗滌3次，*后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
加酶標物：加入孔雀石綠酶標物100μL /孔，
輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃反應30min，甩干孔內液體，重復洗板3次，拍干。
顯色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物
液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃反應15min。
測定：加入終止液50μL/孔，用酶標儀立即 測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測。
七、 結果判定
以標準品百分吸光率為縱坐標，以孔雀石綠標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中孔雀石綠實際濃度。（詳見試劑盒專業分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）
八、 注意事項
① 洗板拍干后應立即進行下一步操作。
② 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。
④ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min，反之則減短反應時間。
九、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質 期： 12個月 |
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