蛋白質測定儀測定中鐵輕化加濃度對精度影響
流速的選擇化學發光流動注射體系中,流速太慢會導致*大發光信號出現在進入流通池之前;流速太快會導致*大發光信號出現在進入流通池之后,都不能被光電倍增管完全檢測。蛋白質含量的測定可以使用蛋白質測定儀進行快速的測定分析。
選擇載流、試樣的流速為5.0mL?min-1,魯米諾與鐵輕化加的流速為4.0mL?min-1。魯米諾濃度的選擇在卵清白蛋白-魯米諾-鐵輕化加和牛血清白蛋白-魯米諾-鐵輕化加兩體系中,當魯米諾的濃度在2.0×10-6~8.0×10-5mol?L-1范圍,隨著濃度的增加,兩體系的相對發光強度也增大,但當魯米諾濃度超過5.0×10-5mol?L-1時,相對發光強度均降低。魯米諾濃度為5.0×10-5mol?L-1時,峰形好,信噪比(S/N=3)*佳。選擇魯米諾濃度為5.0×10-5mol?L-1。使用自動定氮儀分析發下鐵輕化加濃度的選擇試驗結果表明:鐵輕化加濃度為6.0×10-4mol?L-1時相對發光強度達到*大;隨后鐵輕化加濃度繼續增大,蛋白質發光體系的相對發光強度反而降低。試劑pH值的選擇試驗結果表明:鐵輕化加與魯米諾的酸度對發光體系的相對發光強度都有明顯的影響,在pH為12.0和pH為12.2時,卵清白蛋白和牛血清白蛋白的發光強度和信噪比(S/N=3)達到*大。試樣pH值的選擇試驗結果表明:卵清白蛋白和牛血清白蛋白在pH9.0~12.2,pH9.0~12.5范圍內,體系的相對發光強度隨著試樣溶液的pH值升高而增大;隨后試樣的pH增大相對發光強度反而降低,而且噪音增大峰形變差。選擇試樣溶液的pH分別為12.2和12.5。增敏劑的選擇試驗結果表明:聚乙二醇辛基苯基醚的加入使反應的相對發光強度降低;溴化鉀和β-環糊精能明顯增強魯米諾-鐵輕化加體系相對發光強度,但對蛋白質-魯米諾-鐵輕化加無協同增強作用;十二烷基磺酸鈉、三氯甲烷、乙醇、甲醇、乙腈等均未顯示出明顯的協同催化效果,溴化十六烷基三甲基胺對該體系的發光具有明顯增強作用。試驗選擇5.0×10-5mol?L-1溴化十六烷基三甲基胺溶液。
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