一、腺病毒包裝概述:
腺病毒(Adenovirus,Ad) 的基因組為線形雙鏈DNA,長度約為36kb,被包裝在一個二十面體的蛋白質外殼內,可分為編碼區和非編碼區,一般適用于治療的高效控制系統。
腺病毒包裝其主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達載體上,表達載體與腺病毒包裝質粒通過重組后導入腺病毒包裝細胞進行包裝,包裝好的病毒進一步進行擴增和滴度測定。目前較常用的系統如Ad Easy,Ad Max,以及invotrogen的穿梭系統。不同的包裝系統其表達載體與包裝載體發生重組的方式,場所都有所不同,如Ad Easy 系統是在細菌里發生重組的,重組的質粒線性化后轉染細胞可包裝成腺病毒,Ad Max系統表達載體與包裝載體是在細胞中發生重組,invitrogen的穿梭系統則是體外重組。
二、與傳統的轉染方式相比,如脂質體轉染、腺病毒感染具有以下特點:
1.可感染的細胞種類多,宿主范圍廣,幾乎可以感染所有類型的細胞。
2.感染效率高,特別適合質粒載體轉染效率低的細胞,如原代培養細胞,神經細胞等,且外源基因表達水平較高。
3.包裝外源基因的片段大,高達10kb。
4.腺病毒載體構建及包裝容易操作,易于制備出滴度高的大量病毒。
5.當腺病毒感染細胞后,病毒基因組存在于細胞染色體外,不整合到細胞染色體中,避免了因整合引起的基因突變及激活致癌基因,生物安全性高。
三、腺病毒包裝服務內容:
1.客戶提供插入片段信息;如序列、NCBI登錄號等;
2.將目的片段克隆到腺病毒表達載體上;
3.腺病毒包裝、擴增、滴度的測定;
4.實驗報告提交。
四、客戶提供:
1.客戶提供腺病毒包裝的實驗方案;
2.若客戶只提供組織、細胞等樣本,還需提供目的基因NCBI登錄號,本公司將額外收取RNA提取及逆轉錄費用;
3.對于本公司已有的載體和模版,免費提供。
五、實驗報告內容:
1.含目的片段的腺病毒一份,可直接用于轉染;
2.引物序列、載體圖譜一份、測序結果各一份;
3.腺病毒包裝實驗所需試劑耗材、儀器設備、操作過程一份。 |
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