簡介
(1) 高純度硅膠骨架,重金屬含量< 5ppm,具有高表面覆蓋率;
(2) 單功能高密度鍵合,LC-MS Q1檢測無鍵合相泄漏,產品批次之間的差別小于1%;
(3) 理論塔板數大于80000/m,極佳峰形;
(4) 極高穩定性,在pH 2~8條件下連續運行20000床體積,保留時間,柱效及峰形變化極小;
(5) 部分封端,因此特別適合兩性和酸性化合物分離分析。
特征
技術參數
范圍
技術參數
范圍
B型球形硅膠顆粒直徑(um)
3 or 5
使用溫度范圍(℃)
≤70
孔徑(Å)
120
鍵合密度(umol/m2)
3.4
表面積(m2/g)
300
硅烷泄漏*
無
重金屬含量(ppm)
<5
USP Code
L1
使用pH值范圍
2~8
100%水相條件下使用
不能
*LC-MS Q1測試
應用
中性、酸性、兩性和部分堿性化合物在ZW&A C18上均能取得良好的分離。尤其適用于酸性及兩性小分子化合物的分析。對于酸性和兩性化合物,調流動相到pH 2~3左右質子化酸性官能團時可取得極佳峰形和良好分離。對于堿性化合物,調流動相到pH 1~3時可取得比較好的峰形。但在許多情況下,也可將流動相pH調至4~8甚至更高,以維持化合物穩定性或改變分離選擇性。pH 4~8時推薦使用10~100mM緩沖鹽溶液。對于峰明顯拖尾的強堿性化合物,推薦添加10~20mM三乙胺或5~10mM二甲基辛胺改善峰形。這個時候特別推薦使用BetaBasic C18或TX產品。
柱性能
Innovation TM ZW&A C18色譜柱性能參數(柱效、拖尾因子、測試條件等)詳見產品測試證書。
色譜柱安裝和使用
旋下色譜柱兩端柱頭,按照色譜柱標簽上液體流動方向將其連接于儀器。色譜柱不使用時,旋上兩端柱頭。
樣品和流動相
為了避免堵塞色譜柱,樣品和流動相使用前,須過0.45um濾膜、甚至孔徑更小的濾膜。流動相為有機相和水相混合相,例如甲醇-水、乙腈-水。流動相脫氣后方可使用。
操作注意點
承載溶劑:由于C18鍵合相為非極性相,因此,流動相*好為甲醇-水、乙腈-水等混合相。一般情況,隨著有機相比例的增加,樣品的保留時間會縮短。梯度洗脫時,10%甲醇或乙腈常作為初始流動相,100%甲醇或乙腈常作為終點流動相。需要說明的是,C18鍵合相可以與大多數有機相兼容。對于新的色譜柱,柱內含有甲醇(或乙腈)和水混合相,因此,用戶初次使用的流動相中不能含有與之反應的成分。應首先用60%左右甲醇沖洗色譜柱,以除去色譜柱在包裝和運輸過程中引入的雜質。然后使用目標流動相。如果柱壓或基線出現波動,說明柱內有氣泡,此時,應打開排氣閥,同時把流速調至更高,并維持2~5min,以除去氣泡,例如,對于250×4.6mm色譜柱,可將流速調至3mL/min。
pH:推薦pH使用范圍為2~8。
溫度:如果流動相黏度較高,可采用升高柱溫的辦法以提高分離效率。雖然*高操作溫度為70℃,但是,為了更長的使用壽命,建議*佳操作溫度為<50℃,在溫度高于70℃下連續使用,可能損壞色譜柱,尤其是在pH>8或pH<2條件下,對色譜柱損壞更大。
流速:對于5um 250×4.6mm色譜柱,標準流速為1mL/min。
柱保護:為了防止流動相或樣品中的雜質,在色譜柱之前*好安裝一個保護柱或預柱。通常情況下,預柱能阻止來自于樣品、流動相、泵或進樣器的雜質,對色譜柱起到保護作用。
或
儲存
當色譜柱長時間不使用時,色譜柱應儲存在100%甲醇或乙腈中。如果流動相中含有緩沖鹽,使用后,須使用50%甲醇-水或50%乙腈-水沖洗30min~60min。再用100%甲醇或乙腈沖洗30min~60min,保存。為了防止色譜柱床風干,兩端應旋上柱堵頭。
胞內代謝物(糖酵解,戊糖磷酸途徑和三羧酸循環) 離子對色譜分析(舉例)
Innovation TM ZW&A C18特別適合酸性和兩性小分子化合物分離分析(也適用于中性和弱堿性小分子化合物分離分析,也適用于多肽分離純化,多肽分析,蛋白質肽圖)。孔徑:120Å;表面積:300m2/g;部分封端;pH適用范圍1.5-8。詳細的應用請參閱我們的產品手冊。下面以胞內代謝物離子對色譜分析為例。
胞內代謝(糖酵解,戊糖磷酸途徑和三羧酸循環)是生產許多重要的藥物例如防止心臟病藥物的*重要的途徑。糖、磷酸糖、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、羧酸等的準確分析對揭示代謝途徑有非常重要的意義。
Innovation TM ZW&A C18 5um 15cm x 2.1mm HPLC色譜柱可同時分析許多代謝產物。典型的LC-MS/MS MRM圖在下:
流動相A: 10mM三正丁胺 (pH值用乙酸調整到pH5)
流動相B: 甲醇
電離模式: 負
梯度: 95%流動相A到10%流動相A (80 miniutes) |
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