美國abraxis三聚氰胺檢測試劑盒
概述
此試劑盒的原理是酶聯免疫測定法，這個試劑盒可用于一切樣品中三聚氰胺的定性或定量檢測。如果需要進一步測定可以利用HPLC, GC/MS技術。
存儲和穩定性
試劑盒應在 4–8℃保存，在使用前試劑盒內的所有試劑都要回溫到室溫(20-25℃)在有效期內試劑可以一直使用
原理
酶聯免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。將標準、樣品提取物和三聚氰胺酶標記物加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉微孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。在用稀釋的洗液清洗結束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育20分鐘后停止此反應，根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。
敏感性：三聚氰胺檢測限10 μg/L，B/B0為50%時的值為150 μg/L，測定結果在標準曲線的中間是*精確的。
重復性：標準的變異系數(CVs) <10%; 樣品的變異系數（CVs）<15%.
試劑盒組成
1、真空包裝微孔板（8×12條），包被有三聚氰胺多克隆抗體
2、6瓶三聚氰胺標準液，濃度分別為0、20、50、100、200、500ng/mL(ppb)
3、1瓶7mL 三聚氰胺酶標記物
4、5×濃縮洗液 100ml ；使用前需要使用蒸餾水以1：5的比例稀釋
5、1瓶14mL底物（TMB）
6、1 瓶14mL終止液.(注意:鹽酸,勿接觸皮膚!).
步驟
1、在對應的微孔中加入100 μL 標準或樣品。*好做重復。
2、用排槍在每個孔中都加入50μL酶標記物、然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。
3、在室溫下孵育30分。
4、將孔里的液體倒入合適的容器中，每個微孔至少加入250μL、1×洗液，然后棄掉洗液到合適的容器中，重復洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。
5、使用排槍在每個孔中加入100μL底物顯色液，在室溫孵育20分。盡量使其不見光。
6、每孔加入100μL終止液，板中顏色將會由藍色變為棕黃色。
7、450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。
結果評估
可以利用商業ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來評價ELISA結果。也可以通過計算每個標準的%B/B0值，以%B/B0為y軸、三聚氰胺濃度為x軸作一標準曲線。樣品濃度可以通過標準曲線來計算。當樣品中的三聚氰胺濃度高于標準5（500μg/L）時，需要稀釋后重新再測定來獲得更精確的結果。
半定量結果的判定，可根據樣品的吸光度值與標準的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個標準的吸光度值，則說明樣品的三聚氰胺含量大于此標準的濃度，樣品的吸光度值高于某個標準的吸光度值，則說明樣品的三聚氰胺含量小于此標準的濃度。 |
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