美國(guó)abraxis氟喹喏酮檢測(cè)試劑盒
概述
氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒適用于檢測(cè)氟喹諾酮的含量。這個(gè)檢測(cè)適用于定量或定性檢測(cè)水樣或魚蝦產(chǎn)品。其他樣品的提取步驟請(qǐng)與我公司聯(lián)系。如果有必要可以通過(guò)HPLC, GC/MS或其他的傳統(tǒng)方法證實(shí)測(cè)定結(jié)果。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒應(yīng)該保存在4–8°C。在使用之前試劑盒中的試劑要恢復(fù)到室溫。試劑盒在有效期內(nèi)可以使用。結(jié)合物以低壓凍干的形式保存（3瓶）。在檢測(cè)前要用結(jié)合物稀釋液配制一定量低壓凍干形式保存的結(jié)合物。因?yàn)榕渲坪玫娜芤簝H能保存1周所以需要多少就配制多少。
原理
Abraxis氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒的原理是直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫反應(yīng)。通過(guò)特異性抗體來(lái)識(shí)別氟喹諾酮。樣品中氟喹諾酮和氟喹諾酮-HRP酶結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)與溶液中兔抗氟喹諾酮抗體結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。這氟喹諾酮抗體與固定在微孔板上的二抗結(jié)合。洗板，加入底物顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)；樣品中的氟喹諾酮濃度與顯現(xiàn)出的藍(lán)色的深度成反比。加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在450nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)做標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每個(gè)樣品中氟喹諾酮的含量。
A 試劑盒組成
1、96孔酶標(biāo)板：包被有羊抗兔二抗，1塊（12條×8孔）。
2、氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品:7瓶，濃度分別為0, 0.025, 0.05, 0.125, 0.25, 0.5, 和1.0 ng/mL
3、氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物（結(jié)合物）：3瓶（低壓凍干保存），溶解后每瓶3ml
4、結(jié)合物稀釋液12 mL：用于稀釋氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物
5、兔抗氟喹諾酮抗體：1瓶（6ml）
6、樣品稀釋液25ml，用于稀釋樣品。
7、5×濃縮洗液：1瓶（100ml）
8、底物顯色液（TMB）：1瓶（12ml）
9、終止液：1瓶（12ml）。
檢測(cè)步驟
使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來(lái)使其達(dá)到室溫。從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
1、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)和樣品（或樣品提取液）。推薦做2-3個(gè)平行。
2、用多道移液器在每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL重新稀釋的氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物（結(jié)合物）。
3、用多道移液器在每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL兔抗氟喹諾酮抗體溶液，用膠帶蓋上，通過(guò)移動(dòng)酶標(biāo)板來(lái)混合液體。
4、在室溫下孵育60分鐘
5、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。
6、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL底物顯色液。通過(guò)移動(dòng)酶標(biāo)板來(lái)混合液體，混合30秒。在室溫下孵育20-30min，避免陽(yáng)光直射。
7、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。
8、在加入終止液15分鐘內(nèi)，450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）。
結(jié)果分析
可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來(lái)評(píng)價(jià)ELISA結(jié)果。也可以通過(guò)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、氟喹諾酮濃度為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算。當(dāng)樣品中氟喹諾酮的濃度大于1ng/ml時(shí)要稀釋后再測(cè)定。 |
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