檢測熒光的儀器:分子熒光光譜儀又稱熒光分光光度計有的場合也叫熒光光譜儀,是一種定性、定量分析的儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定,不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是240~1000nm,發射波長掃描范圍是200~900nm。可擴展至1700nm或更遠。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
熒光分光光度計結構示意圖
熒光分光光度計的檢測原理是分子發光包括熒光、磷光、化學發光、生物發光和散射光譜等。基于化合物的熒光測量而建立起來的分析方法稱為分子熒光光譜法。由光源發出的光通過切光器使其變成斷續之光,通過激發光單色器變成單色光,此光即為熒光物質的激發光。被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光后照射于光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀。一個激發,一個發射,采用雙單色器系統,可分別測量激發光譜和熒光光譜。
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