RNA pull down實驗原理
先將體外轉錄的RNA結合到Beads上，再將RNA-Beads和細胞裂解液孵育，這樣與目標RNA結合的蛋白便會一起吸附在Beads上。洗滌掉不結合的蛋白后，用洗脫液將RNA-protein復合物從Beads洗脫下來，之后可以采用Western Blot技術檢測特定的結合蛋白，還可以采用質譜方法鑒定與目標RNA結合的未知蛋白。
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RNA pull down應用背景
RNA結合蛋白（RNA binding protein，RBP）是一類功能強大而廣泛的調節因子，約占細胞編碼的所有蛋白的5%~10%。目前除了少數RNA以核酶形式單獨發揮功能，大部分RNA通過與蛋白結合形成RNA-蛋白復合物來發揮作用。
一方面，RBP參與RNA合成、可變剪接、修飾、轉運、翻譯及胞內定位等多個轉錄后調控過程，調控mRNA穩定性、lncRNA活性、miRNA沉默復合體形成等生物學過程；另一方面，RNA也會調節這些蛋白質的活性、定位或與其他蛋白質相互作用，從而影響RBP介導的各種細胞事件。RNA與蛋白質的相互作用對于維持細胞穩態是非常重要的，干擾這種相互作用將會導致細胞功能失調和相關疾病的發生。
目前研究RNA-蛋白質相互作用的方法分為兩大類：一是以感興趣的RNA為中心，尋找與該RNA結合的蛋白質；二是以感興趣的蛋白質為中心，尋找與該蛋白質結合的RNA。RNA pull down屬于前者，通過體外轉錄的方式將感興趣的RNA帶上標簽，通過該標簽使RNA結合到樹脂支持物上，再加入樣本蛋白質與RNA結合，洗滌、洗脫得到與目標RNA結合的蛋白質。
RNA pull-down 實驗服務研究案例—客戶文章解析
RNA pull down實驗外包技術服務結果
lncRNA LAMP5-AS1通過調控DOT1L甲基轉移酶活性促進MLL白血病發展
研究結論
lncRNA LAMP5-AS1在MLL白血病細胞的自我更新過程和分化阻滯 |
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