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供應(yīng)TAP-MS串聯(lián)親和純化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)服務(wù) 供應(yīng)TAP-MS串聯(lián)親和純化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)服務(wù)_廣州輝駿生物科技股份有限公司_供應(yīng)TAP-MS串聯(lián)親和純化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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公 司: 廣州輝駿生物科技股份有限公司
發(fā)布時間:2024年08月08日
有 效 期:2025年02月07日
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詳細(xì)說明

    TAP-MS串聯(lián)親和純化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)原理


過表達(dá)TST-Flag雙標(biāo)簽融合蛋白的細(xì)胞,經(jīng)裂解后先與Streptactin珠子孵育、初次洗滌及洗脫,釋放出蛋白復(fù)合物;再將此蛋白復(fù)合物與anti-Flag珠子結(jié)合、再次洗滌,*后的洗脫產(chǎn)物用質(zhì)譜鑒定未知的互作蛋白。




添加技術(shù)員微信溝通實(shí)驗(yàn)

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TAP-MS串聯(lián)親和純化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)流程



應(yīng)用領(lǐng)域



TAP MS應(yīng)用背景



TAP技術(shù)采用兩步親和純化,提高了純化產(chǎn)物的特異性,具有周期短、假陽性結(jié)果少等優(yōu)點(diǎn)。通過這種方法鑒定到的蛋白質(zhì)相互作用能真實(shí)地反映出細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子之間的聯(lián)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加接近真實(shí)情況,而且TAP技術(shù)還特別適用于蛋白質(zhì)組水平上的大規(guī)模研究。

TAP-MS實(shí)驗(yàn)研究案例—客戶文章解析

鳥嘌呤核苷酸交換因子的差異rac1信號涉及FLII在調(diào)節(jié)rac1驅(qū)動的細(xì)胞遷移中的作用



研究路線
1

過表達(dá)與 pull down實(shí)驗(yàn)證實(shí)Tiam1和P-Rex1誘導(dǎo)不同的rac1下游效應(yīng)

2

通過TAP/ SILAC結(jié)合的方法檢測 Tiam1或 P-Rex1誘導(dǎo)后的rac1相互作用體,證實(shí)Tiam1和P-Rex1對racl互動體有不同的調(diào)控作用

3

免疫共沉淀、 GST pull down和PLA實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)FLII優(yōu)先與活性racl結(jié)合FLII是一種新的富含P-RExl的rac1結(jié)合伙伴

4

結(jié)構(gòu)域分析證實(shí)FLII通過不同的結(jié)構(gòu)域與rac1和P-Rex1結(jié)合

5

Pull down實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)FLII是P-REx1-rac1驅(qū)動的細(xì)胞遷移所必需的

6

基因敲除實(shí)驗(yàn)表明P-Rex1可以通過FLII介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能,包括細(xì)胞收縮,從而促進(jìn)細(xì)胞遷移




研究結(jié)論


研究證實(shí)P-Rex1不僅能激活rac1,而且還能將蛋白質(zhì)(如FLII)定向到rac1的活性形式,以介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能,包括細(xì)胞收縮,從而使P-Rex1能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移。


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