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供應(yīng)SILAC-IP免疫共沉淀實驗服務(wù)

供應(yīng)SILAC-IP免疫共沉淀實驗服務(wù)_廣州輝駿生物科技股份有限公司_供應(yīng)SILAC-IP免疫共沉淀實驗服務(wù)

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公　司：廣州輝駿生物科技股份有限公司

發(fā)布時間：2024年08月08日

有效期：2025年02月07日

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詳細說明

SILAC-IP免疫共沉淀實驗原理

在分離純化誘餌蛋白-互作蛋白復(fù)合物過程中，不可避免地會出現(xiàn)非特異結(jié)合蛋白，這些蛋白會一并被質(zhì)譜鑒定出來，成為假陽性的互作蛋白，影響后續(xù)挑選驗證。傳統(tǒng)的判斷假陽性互作蛋白方法是：用誘餌蛋白組鑒定到的蛋白列表，扣除掉對照組鑒定到的蛋白列表，作為“互作蛋白”。但很多真實的互作蛋白，比如豐度比較高的蛋白，在對照組中也會出現(xiàn)，而傳統(tǒng)的方法就會被排除掉。

SILAC技術(shù)是先將實驗組和對照組的蛋白帶上不同的同位素，即重鏈、輕鏈氨基酸蛋白。復(fù)合物分離后，混在同一管中做酶切質(zhì)譜等。這樣既能鑒定到復(fù)合物蛋白，又能根據(jù)同位素峰強度判斷誘餌蛋白組和對照組中蛋白的相對含量，從而更準確地判斷出互作蛋白。

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SILAC-IP實驗技術(shù)方案

不同的實驗背景和目的需對應(yīng)用不同方案，輝駿生物提供以下三種SILAC-IP實驗方案：

方案一：以野生型細胞株為實驗材料

1．分別用輕、重鏈氨基酸培養(yǎng)細胞，取等量標記好的細胞提取蛋白質(zhì)；
2．提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白分別用Normal IgG和抗bait蛋白的特異抗體做Co-IP；
3．混合輕、重鏈Co-IP產(chǎn)物；
4．胰酶酶切，LC-MS/MS鑒定和定量蛋白。

案二：以過表達誘餌蛋白的細胞株為實驗材料

1. 分別用輕、重鏈氨基酸培養(yǎng)正常對照細胞和過表達誘餌蛋白的細胞株(帶標簽)，取等量標記好的細胞分別提取蛋白質(zhì)，并再次定量；
2. 取等量蛋白混合，用誘餌蛋白抗體做Co-IP；
3. 收集Co-IP后的蛋白液，胰酶酶切，LC-MS/MS鑒定和定量蛋白。

方案三：以干擾誘餌蛋白的細胞株為實驗材料

1. 分別用輕鏈、重鏈氨基酸培養(yǎng)RNAi 誘餌蛋白的細胞株和正常對照細胞株，取等量標記好的細胞分別提取蛋白質(zhì)，并再次定量；
2. 取等量蛋白混合，用誘餌蛋白抗體

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