酶聯免疫或化學發光免疫分析的對象包括有酶、蛋白、抗體、多肽、抗原、核酸、糖、脂質等物質，其中酶、蛋白、抗體或多肽均屬于蛋白類分子，需要使用蛋白緩沖液來保護蛋白。
蛋白緩沖液的基本組成
1.生物緩沖液，包括有Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、PB磷酸緩沖液、CB碳酸緩沖液等，其中Tris的緩沖體系應用較為普遍，緩沖能力比較強，同時對蛋白有良好的溶解性，為蛋白提供合適的pH環境。
2.鹽類，主要是氯化鈉，調節蛋白緩沖液的離子強度（類似鹽濃度）。通常配制時，需較少的離子強度防止蛋白沉淀；但需要將蛋白脫離出來時，應增加離子強度，否則蛋白難以沉淀脫離完全。對于有些蛋白，兩性離子的鹽類有助于蛋白結合。
3.表面活性劑：吐溫20、Triton X-100等，改變緩沖溶液表面張力，增加試劑相容性。
4.有時還需要添加糖類如蔗糖、海藻糖等，惰性蛋白如Casein（酪蛋白），防腐劑如疊氮鈉、卡松（異噻唑啉酮混合物）等。
蛋白緩沖液選擇優化
雖然蛋白緩沖液的基本組成類似，不過沒有通用的緩沖液，不同的系統必須分別優化。不同的蛋白其合適的pH值、親水性、溶解性、穩定性都有差異。另外，蛋白在緩沖液中越不穩定，蛋白結合力越強。當緩沖液pH與蛋白等電點相同時，蛋白*不穩定，容易聚集沉淀。
蛋白緩沖液的穩定作用
蛋白緩沖液中添加有糖，對包被蛋白的穩定性有重要作用，減緩蛋白老化作用，并增加親水性；添加的表面活性劑也是增加蛋白的親水性，惰性蛋白也具有保護作用。在蛋白結合包被步驟中，需用沉淀劑（醇）降低蛋白的穩定性，也可潤濕膜，減少膜帶有的靜電。
這里的蛋白在緩沖液中的穩定與不穩定是特定的，改變緩沖液的部分條件以優化不同的蛋白處理步驟，前提都是不能使蛋白變性或失活。德晟是生物緩沖劑廠家，生產有Tris、Bicine、MOPS等多種緩沖劑。 |
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