在涉及蛋白組學(xué)的實驗中,經(jīng)常需要檢測溶液中的蛋白質(zhì)濃度。常用的蛋白定量的方法分為兩大類:一類是銅還原法,原理是在堿性環(huán)境中利用肽鍵將二價銅還原為一價銅,間接反映蛋白質(zhì)的數(shù)量,如雙縮脲反應(yīng)、改良Lowry法、BCA法等;另一類是染料結(jié)合法,原理是通過染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合,使溶液的光吸收峰發(fā)生改變,從而反應(yīng)蛋白質(zhì)的數(shù)量,*常用的染料是考馬斯亮藍(lán)G250(Bradford法),以及一些金屬-染料復(fù)合物,如兒茶酚-鉬酸復(fù)合物、鄰苯三酚紅-鉬酸復(fù)合物等。
在蛋白質(zhì)提取和蛋白電泳實驗中,經(jīng)常會用到還原劑和去垢劑(表面活性劑),上述蛋白定量方法往往與這些還原劑和去垢劑不兼容:還原劑對銅還原法有強(qiáng)烈干擾作用,即使在沒有蛋白的情況下也能產(chǎn)生顯色反應(yīng),無論是樣品本身含有的抗壞血酸,或是緩沖液中含有的巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)等,均能形成干擾;去垢劑則對染料結(jié)合法有強(qiáng)烈干擾作用,如SDS、Triton X100、Tween-20等,會與染料結(jié)合使溶液光吸收峰發(fā)生改變;高濃度的去垢劑也會對銅還原法產(chǎn)生干擾,但是在常用濃度下一般沒有影響。這些還原劑和去垢劑在蛋白提取緩沖液和電泳相關(guān)緩沖液中很常見,傳統(tǒng)上解決這些干擾的方法是通過蛋白沉淀法去除干擾成分,然后重懸蛋白進(jìn)行濃度測定,其缺點在于顯著增大了工作量,并且增加了實驗誤差。
Bradford法不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,也不受還原劑的影響,但是去垢劑可以造成強(qiáng)烈干擾。通過與染料結(jié)合,去垢劑抬高背景光吸收值,使得檢測靈敏度和檢測范圍發(fā)生改變,甚至無法檢測。本產(chǎn)品通過對Bradford法的改進(jìn),采用特殊配方,消除去垢劑的干擾,可兼容6% SDS、4% Tween20、2% Triton-X100、2% NP40,可耐受各種RIPA裂解液,對蛋白組學(xué)實驗常用的各種緩沖液均可兼容。 |
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