1、與SPR的區(qū)別：SPR在芯片表面固定一個分子，通過芯片表明與溶液間二維相互作用的物質(zhì)量改變而實現(xiàn)SPR檢測。這就帶來了非常顯著的缺點：固定在芯片上的生物分子可能不能維持其天然活性、質(zhì)量遷移影響動力學(xué)分析（例如，流速會影響實驗結(jié)果）、被檢測分子有分子量下限限制、非常大的分子或者生物結(jié)構(gòu)其分子量有上限限制、樣品需要純化及無法檢測完整細胞。相反，KinExA分析三維水平及游離狀態(tài)相互作用，不固定任何分子、不會對平衡帶來影響、沒有質(zhì)量遷移的限制、可以檢測未純化樣品和完整細胞；因此，極寬范圍內(nèi)的生物分子、生物結(jié)構(gòu)及完整細胞均可靈活分析。
應(yīng)用一、KinExA在CAR-T細胞治療中的應(yīng)用
CAR-T細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制研究及檢測項目一般應(yīng)包括：細胞數(shù)量及其存活率、細胞表型、CAR陽性率檢測、生物學(xué)效力檢測，無菌檢測、支原體、熱原/內(nèi)毒素的檢測、CAR-T細胞中病毒載體拷貝數(shù)及整合的檢測等。如果能夠檢測CAR-T細胞與抗原分子的親和力，以及CAR-T細胞上抗體的表達量，無疑會提升CAR-T細胞的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
目前市面上除了KinExA技術(shù)外，沒有其他特別有效的方式檢測完整細胞與分子間的親和力，更無從判斷細胞上分子的表達量。KinExA技術(shù)可以檢測細胞與分子間的親和力，并且可以計算細胞上分子的表達量。其檢測原理如下圖，先將梯度稀釋的細胞與恒定濃度的分子共同孵育達到平衡，離心之后收集上清液（此時上清液中只存在游離的分子），再通過已提前包被過的珠子捕獲游離的分子，用熒光標(biāo)簽的抗體檢測游離分子的量，通過檢測器檢測得到相應(yīng)的數(shù)值后，利用KinExA系統(tǒng)軟件進行數(shù)據(jù)分析。
國內(nèi)某知名CAR-T公司通過KinExA技術(shù)檢測CAR-T細胞與抗原分子間相互作用的結(jié)果表明，CAR-T細胞與抗原的親和力Kd為45.41pM，T細胞表面CAR的表達水平為1.368e+5，Kd與EL的95%置信區(qū)間均較窄，數(shù)據(jù)非常準(zhǔn)確可信。
應(yīng)用二、KinExA在高親和力檢測上應(yīng)用
對于抗腫瘤藥市場，目前精準(zhǔn)醫(yī)療最為成熟的領(lǐng)域還是以靶向藥物為代表的抗腫瘤藥物。由于單克隆抗體類抗癌藥的副作用較小，且靶向性更好，因此，單抗藥物仍將是引領(lǐng)抗腫瘤藥物發(fā)展最為重要的領(lǐng)域。以PD-1為靶點的一類單抗藥呈現(xiàn)出較高的親和力，常規(guī)的相互作用檢測系統(tǒng)例如SPR 、BLI、ITC等由于自身原理的限制均不能檢測高親和力（pM級別）。KinExA技術(shù)有別于常規(guī)的相互作用檢測系統(tǒng)，能準(zhǔn)確有效的檢測高親和力（fM級別）。 |
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