1.5ml細(xì)胞轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體2000Invitrogen銷售
常用1.5ml Invitrogen脂質(zhì)體2000作用:
1、蛋白酶K:能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2、SDS:十二烷基硫酸鈉,溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。
3、IPTG:異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,
使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,
IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的顯色試劑,在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選。
5、G418:一種抗生素,對幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染*常用的選擇試劑。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方
6、DMSO:二甲基亞砜。實(shí)驗室常用于作液體層析溶劑,同時用作測試物質(zhì)紫外消光值上時用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴。
7、曲拉通X-100:TritonX-100,用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用, 能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40。
8、NP-40:很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
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