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蛋白質相互作用研究技術專題之免疫共沉淀
蛋白質是分子功能的執行者，調控細胞中的所有生物系統。但是，通常它們不是“單打獨斗”的，絕大多數的功能蛋白質會與其他蛋白質相互作用，一起調控生命過程。下面我們給大家介紹一下蛋白質相互作用研究中比較常用的一種技術——免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，COIP）。
實驗原理：COIP利用抗原抗體之間具有特異的免疫結合的原理，在細胞裂解液中加入特異性抗體，將抗原及與抗原結合的蛋白沉淀下來。免疫復合物可以通過western blot的方法驗證抗原和其他蛋白之間的相互作用，也可以用質譜的方法，檢測抗原的結合蛋白成員。
實驗步驟：COIP實驗是怎么做的呢？簡單來說，COIP實驗大概包括下面的幾個流程：
構建表達載體，轉染細胞（此步適用誘餌蛋白是外源性的，內源性的直接進入下一步驟）→溫和條件下收集細胞裂解物→細胞裂解物與抗體孵育，洗去未結合的蛋白→用合適的洗脫液將誘餌蛋白及結合的互作蛋白復合物洗脫下來→western blot或者質譜分析
COIP技術的優缺點：
優點：（1）得到的互作蛋白是細胞內與誘餌蛋白天然互作的，符合體內真實生理情況；（2）實驗條件溫和，可避免人為的影響；（3）可分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。
缺點：（1）不適用于結合力弱或者瞬間結合的蛋白互作研究。
COIP實驗效果受多種因素影響，需要注意以下幾點：
1. 首先是抗體的質量，需要選用IP級別的抗體；
2. 其次細胞數目，一次COIP實驗建議使用2個10cm皿的生長至80%匯合度的細胞；
3. 細胞需用溫和的裂解液提取蛋白，防止降解和人為修飾；
4. 務必設置對照，通常內源的蛋白可用Nomal IgG作為對照，外源的蛋白則用空載體轉染細胞作為對照。
結語：
COIP的技術暫時介紹到這里了，同學們如果對實驗有什么疑問，歡迎撥打我們的免費熱線4006991663，我們的技術客服人員將詳細為您解答。
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