人白介素免疫組化試劑 人胰島素免疫組化試劑
我公司各種屬免疫組化試劑盒規格:
產品規格:50T/100T
存儲條件:-20℃保存
試劑盒組成:
試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
試劑B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
試劑C 已稀釋的即用型COX-2 一抗(2.5ml)
試劑D 生物素化羊抗兔IgG 1 支(濃度1.5 mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA 復合物1 支(濃度1 μM,稀釋比1:50~1:200)100 μL
試劑F DAB 顯色液5ml
免疫組化試劑盒工作原理用石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復,
直接進入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
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