蛋白純化系統(tǒng)的目的是將目標(biāo)蛋白質(zhì)從細(xì)胞裂解液的全部組分中分離出來(lái),同時(shí)仍保留蛋白的生物學(xué)活性及化學(xué)完整性。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項(xiàng)艱巨而繁重的任務(wù),需根據(jù)蛋白的特性選擇合適的純化方法來(lái)提高獲得的蛋白制品的純度。
蛋白純化系統(tǒng)的原理為:不同蛋白質(zhì)的氨基酸序列及空間結(jié)構(gòu)不同,導(dǎo)致其在物理、化學(xué)、生物學(xué)等性質(zhì)上存在差異,利用待分離蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)性質(zhì)上的差異,即可以設(shè)計(jì)出一套合理的蛋白純化系統(tǒng)方案。
蛋白純化系統(tǒng)大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段兩個(gè)階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如RNA、DNA等分開(kāi),常用的方法為硫酸銨沉淀法。精細(xì)純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開(kāi)來(lái),常用的方法有:凝膠過(guò)濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。 |