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| 篤瑪 枸櫞酸納抗凝羊血 說明書 |
枸櫞酸納抗凝羊血
常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用最廣泛的一種。
GST標簽體系具有蛋白表達率高,表達產(chǎn)物純化方便,利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測GFP或其適當?shù)耐蛔凅w,也可以檢測和GFP或其適當?shù)耐蛔凅w融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位,以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。
Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力,因此Myc標簽系統(tǒng)廣泛應用于檢測但很少用于純化。
HA標簽系統(tǒng)利用一個HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應用于多種細胞類型,相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。
MBP標簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。
其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但應用相對較少。
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