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Pfu DNA聚合酶(高保真酶)

詳細說明

    Pfu酶用途



主要用于對 PCR 保真性要求較高的實驗,如基因篩選、克隆表達、突變檢測、定點突變等等。



Pfu酶特征



• 克隆有 Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經誘導表達后,再經三次過柱純化分離出來的一個約 90 KD 的重組蛋白。



• 具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力;有 3 '到 5 ‘外切酶的活性即糾錯能力,通俗地說,出錯的機率是普通 Taq 酶的十分之一。為了減少由 3′-5′ 外切酶活性引起的引物降解,閃晶公司強烈推薦在冰浴上添加所有的試劑并且在溫度達到 60 -65°C 時再加入 Pfu DNA 聚合酶以便進行熱啟動或者在冰浴上添加試劑后放在預熱到 95°C 的 PCR 儀上。



• 無 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性, 不能用于實時熒光PCR 。



• 無 3 ‘端加 A 的功能,產物為平端,如果需要做 T - A 克隆,需要做添 A 實驗。



• 無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。



• SDS - PAGE 檢測,純度> 95% 。



• 延伸溫度 72 ℃ , Mg 2+ 濃度 2.0mM , dNTPS 濃度 0.2mM ,延伸速度為 600base/min ; Pfu DNA 聚合酶比 Taq DNA 聚合酶的延伸反應速率低,因此閃晶公司推薦延伸反應時間為每 kb 需 2 分鐘。



• 10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ), 1% TritonX-100 和 20mM MgSO4 。



• Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% 甘 油, 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。



Pfu酶單位定義



在 74℃ 條件下, 30 分鐘內催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。反應條件為: 50mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應體積為 50ml 。



Pfu酶 (大宗用戶價格面議,電話:021-54460831)

 
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