目前生物柴油主要采用化學(xué)法生產(chǎn)，現(xiàn)正在研究生物酶法合成生物柴油技術(shù)。用發(fā)酵法（酶）制造生物柴油，混在反應(yīng)物中的游離脂肪酸和水對酶催化劑無影響，反應(yīng)液靜置后，脂肪酸甲 酯即可分離。日本大阪市立工業(yè)研究所成功開發(fā)使用固定化脂酶連續(xù)生產(chǎn)生物柴油，分段添加甲醇進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)溫度為30℃，植物油轉(zhuǎn)化率達(dá)95%，脂酶連續(xù)使用100 天仍不失活。反應(yīng)后靜置分離，得到的產(chǎn)品可直接用作生物柴油。
通過加氫裂化方法也可生產(chǎn)生物柴油，現(xiàn)已開發(fā)了幾種新工藝。加氫裂化方法不聯(lián)產(chǎn)丙三醇。可將植物油轉(zhuǎn)化為高十六烷值低硫柴油，可加工寬范圍原料包括高含游離酸的物料。加氫裂化過程中發(fā)生幾種反應(yīng)，包括加氫裂化、加氫處理和加氫。產(chǎn)率為75%～80%，十六烷值高，硫含量＜ 10PPm。28 天后可生物降解95%，而石油基柴油在同樣時間內(nèi)降解40%。與其他生物柴油比，主要優(yōu)點是可降低NOx 排放。該工藝采用常規(guī)的煉廠加氫處理催化劑和氫 氣，可供煉油廠選用，因有氫 氣可用，可方便地與煉油廠組合在一起。
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