樣品要求
蛋白樣品-80℃保存,干冰寄送,下單前請先和工作人員溝通,確認測試細節。
常見問題
1:適配子DNA單鏈,可以用帶有互補鏈的磁珠進行pull down嗎?如果可以,效率怎么樣?一般需要怎么優化條件?
理論上說,若DNA單鏈能夠與磁珠上的互補鏈雜交成功,是可以進行pull down實驗的; 效率如何不好確定,這個取決于兩條DNA單鏈是否能雜交成功、蛋白-DNA結合的強弱、蛋白的豐度等。
2:DNA pull down的 原理?
針對目標區域設計特異性DNA探針并進行生物素標記,生物素探針可與偶聯在磁珠上的鏈霉親和素結合;細胞蛋白提取物與磁珠-DNA探針孵育,從而釣取與DNA探針有特異性結合的互作蛋白質。
3:你們對外服務的檢測項目有哪些?
細胞、動物/植物組織、菌體都可以做DNA pull down, 我們還可以做的檢測實驗具體如下:
(1) RNA-蛋白/RNA互作及定位:RNA pull down、RIP、fish等;
(2) DNA-蛋白互作:DNA pull down、ChIP、EMSA、雙熒光素酶、酵母單雜等;
(3) 蛋白-蛋白互作:GST/his pull down、CoIP、酵母雙雜等;
(4) 細胞學檢測:細胞增殖-MTT/CCK-8, 細胞凋亡, 細胞周期,細胞遷移、侵襲:劃痕愈合/Transwell/Transwell(Matrigel)等;
4:效率有多高?
效率主要取決于蛋白-DNA結合的強弱、蛋白的豐度等。
5:老師,對照組的DNA序列是怎么選擇的?
一般對照組是沒有探針的,對照組是磁珠beads+蛋白 |
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