河南專業科研細胞實驗技術服務免疫熒光染色實驗-效勝實業
效勝實業河南專業科研細胞實驗技術服務免疫熒光染色實驗
本公司開展了石蠟包埋、石蠟切片、冰凍切片、HE染色，massson染色，PAS染色等染色，免疫組化，免疫熒光，WB .PCR.透射電鏡，掃描電鏡，細胞培養等實驗服務；一、服務介紹
免疫熒光細胞化學是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。
二、實驗原理
將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
三、實驗流程
免疫熒光單標記方法
免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質分子，方法比較簡單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結果。具體染色方法如下。
1、所需材料與試劑
a, 培養在蓋玻片或玻璃培養皿中融合程度達到60%-70%的細胞。
b, 一抗、FITC或TRITC標記的二抗。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃預冷20 min)。
d, 封閉液。
e, 0.01mol／LPBS緩沖液。
2、染色方法
a, 取出培養有細胞的蓋玻片或glass-bottom培養皿，用0.01MPBS洗2-3遍。
b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain
c, 加入4%多聚甲醛試問固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。
d，正常阻斷血清1:20封閉試問20-30 min，抑制IgG的非特異性結合。阻斷血清必須選擇與二抗同一種屬的正常血清。
e, 去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃過夜。抗體以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經試驗而定)。
f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。
g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。
h, 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用濾紙吸干。
i, 90%甘油(PBS配制)封片。
j, 激光掃描共焦顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。
免疫熒光雙標記方法
免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內兩種蛋白質分子，當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些，首先應注意所用的一抗必須是來自不同種屬動物的 |
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