Hoechst33342染色液
Hoechst 33342也稱bisBenzimide H 33342或HOE 33342。分子式為C27H28N6O· 3HCl·3H2O，分子量為615.99，CAS Number 23491-52-3。Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33342也用于普通的細(xì)胞核染色、DNA染色。
Hoechst 33342的*大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，*大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm，Hoechst 33342和雙鏈DNA結(jié)合后，*大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm， *大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。Hoechst33342染色液(含封片劑)可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，無(wú)需封片操作。
Hoechst33342染色液
操作步驟(僅供參考)：
(一)固定的組織細(xì)胞染色
1、對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后沖洗去除固定劑。如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33342染色，如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33342染色。對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量Hoechst33342染色液(含封片劑)，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品3倍體積以上的Hoechst33342染色液（含封片劑），充分混勻。
2、室溫放置5～8min。
3、輕輕吸除Hoechst33342染色液(含封片劑)。
4、用無(wú)菌的PBS或生理鹽水清洗2～3次。
5、無(wú)需封片，直接在熒光顯微鏡下觀察。
(二)活細(xì)胞染色
1、取96、24、6孔板培養(yǎng)細(xì)胞至合適狀態(tài),按96孔板加入100ul、24孔板加入500ul、6孔板加入1ml的比例，加入適當(dāng)?shù)腍oechst 33342染色液，染液必須充分覆蓋住細(xì)胞。
2、在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的條件下培養(yǎng)20～30min。
3、輕輕吸取Hoechst 33342染色液（含封片劑）。
4、用無(wú)菌的PBS或生理鹽水清洗2～3次，每次3～5min。
5、無(wú)需封片，直接在熒光顯微鏡下觀察。
Hoechst33342染色液
注意事項(xiàng)： Hoechst33342染色液(含封片劑)的濃度適用于各種常規(guī)染色的需要。
熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測(cè)。
避免反復(fù)凍融，否則容易失效。
Hoechst 33342對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
Hoechst33342染色液
染色結(jié)果：細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 |
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