雞足盂蛋白(PCX) ELISA 試劑盒
ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆�，有條件的，*-70℃凍存?zhèn)溆�。�?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。 篤瑪代測(cè)服務(wù)：
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容： 1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；4、聯(lián)系方式；5、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
雞足盂蛋白(PCX) ELISA 試劑盒
ELISA 實(shí)驗(yàn)步驟：
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過(guò)夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過(guò)氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。
5.顯色：TMB顯色
A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、 |
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