用途
主要用于 PCR 擴增和一步法 RT － PCR ；它同時具有 DNA 聚合酶的活性和反轉酶的活性；可用于實時 PCR 。
特征
• Tth DNA 聚合酶是一種熱穩(wěn)定性酶，分子量為 92kDa ，從 Thermus thermophilus HB-8 中分離。
• 在 74℃ 時可進行 DNA 復制，在 95℃ 的半衰期為 20 分鐘。
• Tth DNA 聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向發(fā)生聚合反應，形成雙鏈 DNA ，也可在鎂離子存在的條件下，以 RNA 為模板沿 5'—3' 方向發(fā)生核苷酸聚合反應。
• 該酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，無 3' － 5' 外切酶活力， 可用于實時熒光 PCR 。
• 能在較高的溫度下進行逆轉錄，增加了引物雜交和延伸的特異性；減少了由于 RNA 二級結構引起的問題。
• 10× 逆轉錄反應緩沖液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反應緩沖液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。
• 無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。
• SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。
單位定義
在 70℃ 條件下， 30 分鐘內催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為 TCA 不溶性物質所需的酶量為一個單位。反應條件為： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作為底物。 |
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