一、原理
本試劑盒采用固相酶聯免疫吸附ELISA原理，通過黃曲霉毒素B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗體，待測抗原的競爭免疫反應，以及酶的催化顯色反應來檢測AFB1，優點是靈敏度高，特異性好，操作簡便，結果易判讀，適用于食品、飼料及相關原料中AFB1的定量檢測。
二、試劑盒技術指標
試劑盒靈敏度：0.1 ppb
回收率： 谷物/飼料中AFB1回收率 95%±15%
變異系數：批內變異系數<10%，批間變異系數<15%。
三、試 劑 盒 組 成
1．微量測試孔： 96T/8孔
2．標 準 液×6瓶：（1 mL/瓶） 0 ppb 0.05 ppb 0.15 ppb 0.45 ppb 1.35 ppb 4.05 ppb
3．抗體工作液 7 mL
3．酶標記物 12 mL
4．底物緩沖液 7 mL
5．底物液 7 mL
6．終止液 7 mL
7．20倍濃縮洗滌液 50 mL 加蒸餾水后稀釋到1000 mL。
四、樣本前處理步驟
實驗準備：配制60 %甲醇水溶液（v/v，60：40）和20 %甲醇水溶液（v/v，20：80）。
注意：請精確配制上述溶液，以免影響檢測的準確性。
1 . 脂肪含量低的固體樣品（如大米、玉米、小麥和飼料等）
1、稱取5 g 粉碎樣品于100 mL帶塞三角瓶內，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液。
2、將加入了甲醇水溶液的樣品放入振蕩器內（或用手強力振蕩），充分振蕩3 min后，用濾紙過濾，收集濾液。
3、取濾液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混勻，用whatman 1號濾紙過濾，此為樣品待檢液。
2．醬油、醋
1、稱取5 g樣品于25 mL小燒杯中，用10 mL蒸餾水將試樣轉移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發皿中的凝結物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）
1、稱5 g油樣于25 mL小燒杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次將試樣轉移至125 mL分液漏斗中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞輕輕振搖5 min，靜置分層，放出下層60%甲醇水提取液。
2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
4．酒類
1、稱取5 g樣品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發皿中的凝結物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
5．花生
1、樣品去殼粉碎，稱取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚），振搖10 min，用whatman 1號濾紙過濾。
2、收集濾液于125 mL分液漏斗中，靜置分層后放出下層60%甲醇水提取液。
3、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，再用whatman 1號濾紙過濾，此為樣品待檢液。
6．月餅、桃酥、花生醬等
1、稱取5 g粉碎樣品于125 mL具塞三角瓶中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚）加塞震蕩10 min，過濾，收集濾液于分液漏斗中，靜置分層。
2、待下層甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，取10 mL于20 mL蒸發皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發皿中的凝結物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。
7．面粉、飼料濃縮料
1、稱取5 g樣品于125 mL具塞三角瓶中，準確加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震蕩10 min，過濾，收集濾液。
2、吸取10 mL濾液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞振搖3 min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，取10 mL于20 mL蒸發皿中，65 ℃水浴通風揮干。揮干冷卻后，準確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發皿中的凝結物充分溶解。
3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。 |
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