金牌酶用途
主要用于 PCR 擴增和一步法 RT － PCR ；特別適合臨床 PCR 診斷試劑，這樣可以降低運輸條件和降低對臨床操作人員的要求。
金牌酶特征
• 克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表達后，經(jīng)過化學修飾，再經(jīng)三次過柱純化分離出來的重組蛋白。
• 在常溫下沒有聚合酶的活性，需經(jīng)過 95 ℃ 4mins 的高溫造成化學修飾基團的脫落，然后才有聚合的活性；這樣就避免在低溫階段的非特異性擴增；大大提高了 PCR 反應的靈敏度和特異性。隨著 PCR 擴增的進行，酶活性會被逐步釋放，這樣就有效提高擴增效率及產(chǎn)物量。
• 具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；無 3 '到 5 ‘外切酶的活性。
• 具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于實時熒光 PCR 。
• 具有 3 ‘端加 A 的功能，產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接用于 T － A 克隆。
• 無外源核酸酶和細菌 DNA 污染。
• SDS － PAGE 檢測，純度＞ 95% 。
• 延伸溫度 72 ℃ ， Mg 2+ 濃度 1.5mM ，dNTPS 濃度 0.2mM , 延伸速度為 2000base/min 。
金牌酶單位定義
在 74℃ 條件下， 30 分鐘內催化 10nmol dNTP 的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。反應條件為： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標記和標記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應體積為 50ml 。
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